細胞周期分析PI染色法

細胞周期流式檢測（PI染色法）

1. 收集細胞：若懸浮生長細胞離心棄培養(yǎng)基，用PBS洗滌一次（建議用PBS + 1% FBS或PBS + 0.1% BSA），若是貼壁生長細胞，加入合適體積的0.25%胰酶消化一分鐘左右（可顯微鏡觀察待細胞脫壁），吹起細胞后加入5ml 含10%血清的培養(yǎng)基，終止作用，轉移細胞至15ml離心管中，300g 離心5分鐘，用PBS洗滌細胞一次；

2. 用PBS洗滌細胞一次，300g離心5分鐘后棄上清；

3. 用500ul PBS 重懸細胞，振蕩混勻后加入5ml 70%冷乙醇溶液（放置在-20度預冷的70%乙醇溶液），混勻后放置4度過夜（可放置一周）；

4. 500g離心5分鐘后棄乙醇，用PBS懸浮細胞洗滌細胞一次；

5. 用PBS調節(jié)細胞濃度為5 X 106個/ml,取500ul細胞懸液加入100ul  500ug/ml 的PI染色（用PBS配制500ug/ml的PI染色液），4°C避光放置30分鐘；

6. 加入100ul 煮沸過的RNase A （10mg/ml） 37度孵育30分鐘；

7. 混勻細胞后待上流式儀獲取分析。

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